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BL21 Star(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞

簡要描述:BL21 Star(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 保存條件:-80℃ 基因型F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm rne131 (DE3)

  • 產(chǎn)品型號(hào):ABG204-50
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時(shí)間:2024-03-25
  • 訪  問  量:238

詳細(xì)介紹

品牌Abnbio貨號(hào)ABG204-50
規(guī)格50X100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,食品,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥

基因型

F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm rne131 (DE3)


簡要說明

BL21 Star(DE3)感受態(tài)細(xì)胞來源于BL21(DE3)菌株,含有rne131基因突變體,rne131突變基因能夠增強(qiáng)菌株細(xì)胞內(nèi)mRNA的穩(wěn)定性,從而提高蛋白表達(dá)能力。主要適用于T7啟動(dòng)子表達(dá)載體(如pET系列)的高水平蛋白表達(dá)。BL21 Star(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作,經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率達(dá)108cfu/μg。


操作說明

1、取100μl冰上融化的BL21 Star(DE3)感受態(tài)細(xì)胞,加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養(yǎng)基,混勻后37℃,200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。


注 意:

1.Brian Caliendo (Voigt 實(shí)驗(yàn)室)報(bào)道過pCP20質(zhì)粒比較難于轉(zhuǎn)化到這個(gè)感受態(tài)細(xì)胞中,而pCP20轉(zhuǎn)化到其他菌株中都很正常,但是菌體原因未知。

2.即使不加葡萄糖,BL21(AI) 細(xì)胞的araBAD啟動(dòng)子下游的本底蛋白表達(dá)水平仍然很低,加入葡萄糖后能夠進(jìn)一步的降低本底蛋白的表達(dá)水平。



注意事項(xiàng)

1、感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過長,長時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。 

2.混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。

4.誘導(dǎo)時(shí),IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。

5.為獲得需要量的蛋白,最佳誘導(dǎo)時(shí)間、溫度以及IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化




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