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M15(pREP4) 感受態(tài)細胞

簡要描述:M15(pREP4) 感受態(tài)細胞 保存條件:-80℃ 基因型F-, Φ80ΔlacM15, thi, lac-, mtl-, recA+,KmR

  • 產品型號:ABG223-50
  • 產品品牌:Abnbio
  • 更新時間:2024-03-27
  • 訪  問  量:230

詳細介紹

品牌Abnbio貨號ABG223-50
規(guī)格50X100ul供貨周期現貨
主要用途感受態(tài)細胞應用領域環(huán)保,食品,化工,生物產業(yè),制藥

基因型

F-, Φ80ΔlacM15, thi, lac-, mtl-, recA+,KmR


簡要說明

M15(pREP4)蛋白表達菌株含有pREP4質粒,該質粒通過p15A復制子啟動復制,可以與許多原核表達質粒共存于同一大腸桿菌細胞中;同時該質粒攜帶lac I基因,可高效表達lac抑制蛋白,在IPTG誘導前可抑制目標蛋白的本底表達,特別適合毒性基因的表達。M15(pREP4)菌株是PQE系列質粒的配套菌株,特別適合PQE系列質?;蛴蒃.coli T5 啟動子誘導表達的質粒的蛋白表達。pREP4質粒賦予該菌株ka那霉素抗性。M15(pREP4)感受態(tài)細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率達2×108cfu/μg DNA。


操作說明

1、M15(pREP4)感受態(tài)細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的質粒并用手撥EP管底混勻,冰中靜置25分鐘。 

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。 

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取50 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養(yǎng)基上(若質粒濃度較高,也可稀釋后涂板,務必保證能在平板上挑到單克隆菌落)。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng),M15(pREP4)菌株在平板或液體培養(yǎng)基中生長時,需在培養(yǎng)基中加入終濃度為35ug/ml的ka那霉素。


注意事項

1、感受態(tài)細胞最好在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。

2. M15(pREP4)菌株在平板或液體培養(yǎng)基中生長時,需在培養(yǎng)基中加入終濃度為35ug/ml的ka那霉素。

3. 轉化高濃度的質??上鄳獪p少最終用于涂板的菌量。

4. 為獲得需要量的蛋白,最佳誘導時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。













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