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JM109(DE3) 感受態(tài)細胞

簡要描述:JM109(DE3) 感受態(tài)細胞 保存條件:-80℃ 基因型endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+)relA1supE44D(lac-proAB) [F? traD36 proAB laqI qZΔM15](DE3)

  • 產(chǎn)品型號:ABG222-50
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時間:2024-03-27
  • 訪  問  量:374

詳細介紹

品牌Abnbio貨號ABG222-50
規(guī)格50X100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途感受態(tài)細胞應用領(lǐng)域環(huán)保,食品,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥

基因型

endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+)relA1supE44D(lac-proAB) [F? traD36 proAB laqI qZΔM15](DE3)


簡要說明

JM109(DE3)菌株來源于JM109,用于高效表達克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達載體(如pET系列)的基因。λ噬菌體DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶,該區(qū)整合于JM109的染色體上,所以稱為JM109(DE3)。可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,用于pET系列,pGEX,pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達。JM109(DE3)菌株不可用于藍白斑篩選試驗。JM109(DE3)感受態(tài)細胞由特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率高于108 cfu /μg DNA。


操作說明

1、JM109(DE3) 感受態(tài)細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,待菌塊融化,加入目的DNA并用手撥EP管底混勻,冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。 

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養(yǎng)基,混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。


注意事項

1、感受態(tài)細胞最好在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳獪p少最終用于涂板的菌量。

3. 誘導時,IPTG濃度可選(0.1-2 mM均可)。

4. 為獲得需要量的蛋白,最佳誘導時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。













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