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OrigamiB(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞

簡要描述:OrigamiB(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 保存條件:-80℃ 基因型F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC
(DE3) gor522::Tn10 trxB (KanR,TetR)

  • 產(chǎn)品型號:ABG215-50
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時間:2024-03-27
  • 訪  問  量:227

詳細(xì)介紹

品牌Abnbio貨號ABG215-50
規(guī)格50X100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,食品,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥

基因型

F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC(DE3) gor522::Tn10 trxB (KanR,TetR)


簡要說明

OrigamiB(DE3)感受態(tài)細(xì)胞包含突變的硫氧還蛋白還原酶(thioredoxin reductase)(trxB)和gu胱甘肽還原酶(glutathione reductase)(gor)基因,表達主要還原途徑的兩個關(guān)鍵酶。有利于形成正確折疊的含有二硫鍵的蛋白,增強蛋白的可溶性。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)(DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶),可同時表達T7RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達,具有ka那霉素和四環(huán)素抗性,不能用于具有ka那霉素抗性質(zhì)粒的表達。OrigamiB(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作,經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達


操作說明

1、取100μl冰上融化的OrigamiB(DE3)感受態(tài)細(xì)胞,加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

 3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養(yǎng)基,混勻后37℃,200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。


注意事項

1、感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。

2.混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作。

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。

4.誘導(dǎo)時,IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。

5.為獲得需要量的蛋白,最佳誘導(dǎo)時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。

 6.具有ka那霉素抗性,不能用于具有ka那霉素抗性質(zhì)粒的表達。









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