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當前位置:首頁   >  產(chǎn)品中心  >  Abnbio感受態(tài)細胞  >  表達 感受態(tài)細胞  >  ABG205-50BL21-Star(DE3)pLysS 感受態(tài)細胞

BL21-Star(DE3)pLysS 感受態(tài)細胞

簡要描述:BL21-Star(DE3)pLysS 感受態(tài)細胞 保存條件:-80℃ 基因型F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm rne131 (DE3)pLysS(CamR)

  • 產(chǎn)品型號:ABG205-50
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時間:2024-03-25
  • 訪  問  量:228

詳細介紹

品牌Abnbio貨號ABG205-50
規(guī)格50X100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途感受態(tài)細胞應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,食品,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥

基因型

F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm rne131 (DE3)pLysS(CamR)


簡要說明

BL21Star(DE3)pLysS 菌株來源于BL21(DE3),含有rne131突變(RNaseE基因),RNaseE 基因的突變降低了內(nèi)源RNase的積累,增強菌株細胞內(nèi)mRNA 的穩(wěn)定性,從而提高異源蛋白的表達水平。主要適用于T7 啟動子表達載體(如pET系列)的高水平蛋白表達,同時含有大腸桿菌 RNA聚合酶,也可用于非T7啟動子表達載體(pGEX,pMAL等)的蛋白表達。由于BL21 Star(DE3)菌株的異源基因基礎(chǔ)表達水平較高,所以不適合毒性蛋白的表達。BL21 Star(DE3)pLysS 菌株攜帶pLysS 質(zhì)粒,具有氯lu素抗性。pLysS 含有表達 T7溶jun酶的基因,T7溶jun酶可以作用于大腸桿菌細胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌,還可與T7RNA聚合酶結(jié)合抑制其轉(zhuǎn)錄活性,進而降低目的基因的背景表達水平,但不干擾IPTG 誘導(dǎo)的表達。pLysS 質(zhì)粒含有p15A復(fù)制起始子,可以和含有 pUC或 pBR322 等復(fù)制起始子的質(zhì)粒兼容。BL21 Star(DE3)pLysS感受態(tài)細胞由特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達107 cfu/μg DNA。


操作說明

1、BL21 Star(DE3)pLysS 感受態(tài)細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的質(zhì)粒并用手EP管底輕輕混勻,冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激 45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

 3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養(yǎng)基,混勻后37℃, 200 rpm 復(fù)蘇60 分鐘。

4.5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。-



注意事項

1、感受態(tài)細胞最好在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。

4. 誘導(dǎo)時,IPTG濃度可選(0.1-2mM 均可)。

5. 為獲得需要量的蛋白,最佳誘導(dǎo)時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優(yōu)化6. BL21 Star(DE3)pLysS 菌株攜帶pLysS質(zhì)粒,除復(fù)蘇培養(yǎng)基為無抗生素外,其余所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)液均應(yīng)含有34µg/ml氯lu素,以防質(zhì)粒丟失。






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