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BL21(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞

簡(jiǎn)要描述:BL21(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞 保存條件:-80℃ 基因型F- ompT hsdS(rB-mB-) gal dcm(DE3)pLysS Camr

  • 產(chǎn)品型號(hào):ABG202-50
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時(shí)間:2024-03-25
  • 訪  問  量:244

詳細(xì)介紹

品牌Abnbio貨號(hào)ABG202-50
規(guī)格50X100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,食品,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥

基因型

F- ompT hsdS(rB-mB-) gal dcm(DE3)pLysS Camr


簡(jiǎn)要說明

BL21(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞攜帶pLysS質(zhì)粒,具有氯mei素抗性。pLysS含有表達(dá)T7 溶jun酶的基因,T7溶jun酶可以作用于大腸桿菌細(xì)胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌,能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平,但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá),適合表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)(DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶),BL21(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率高達(dá)108cfu/μg。


操作說明

  1. 取100μl冰上融化的BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞,加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。

   2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。 

   3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養(yǎng)基,混勻后37℃,200rpm復(fù)蘇60分鐘

   4.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含34 µg/ml氯mei素及所選質(zhì)粒篩選抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。 

   5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。


注意事項(xiàng)

  1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。

   2.混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。

   3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。

   4.誘導(dǎo)時(shí),IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)

   5.為獲得需要量的蛋白,最佳誘導(dǎo)時(shí)間,溫度,IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。

   6.BL21(DE3)pLysS 菌株攜帶pLysS質(zhì)粒,除復(fù)蘇培養(yǎng)基為無抗生素外,其余所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)液均應(yīng)含有34µg/ml氯mei素,以防質(zhì)粒丟失。


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