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Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細(xì)胞

簡要描述:EPI300 Chemically Competent Cell/Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細(xì)胞
保存條件:-80℃

  • 產(chǎn)品型號:EPI300
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時間:2024-03-21
  • 訪  問  量:397

詳細(xì)介紹

品牌Abnbio貨號ABG025-50
規(guī)格50支100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥

EPI300 Chemically Competent Cell

基因型:

F – mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ?M15?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara,leu)7697 galU galK λ–rpsL nupG trfA dhfr。

簡要說明:

EPI300細(xì)胞含有一個突變的trfA基因,該基因表達(dá)出的蛋白產(chǎn)物可以促進(jìn)含有ori V復(fù)制子的質(zhì)粒的高拷貝擴(kuò)繁,誘導(dǎo)劑Ⅰ可以誘導(dǎo)trfA基因的表達(dá)。當(dāng)含有ori V復(fù)制子質(zhì)粒的EPI300細(xì)胞在LB/2YT或SOB培養(yǎng)基中生長時,trfA基因的表達(dá)被抑制,ori V復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)維持在很低的水平;當(dāng)在培養(yǎng)基中加入誘導(dǎo)劑Ⅰ,ori V復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)可維持在很高的水平,提高了質(zhì)粒產(chǎn)量。因此EPI300菌株可以降低ori V復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù),特別適合于各種不穩(wěn)定 DNA 或毒性基因的克隆。 [mrr-hsdRMS-mcrBC]基因型使EPI300菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA(例如:哺乳動物基因組DNA)。

recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。lacZΔM15 標(biāo)記的存在使EPI300可用于藍(lán)白斑篩選,rpsL賦予其lian霉素抗性。EPI300感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá)3×108cfu/μg DNA

操作說明:

1.EPI300感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物)并用手bo打EP管底混勻,冰中靜置25分鐘。 

2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。 

3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養(yǎng)基,混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4.5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。 

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15 h。

注意事項(xiàng):

1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。 

2.混入目的DNA時,應(yīng)輕柔操作。



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