EPI400 Chemically Competent Cell

基因型：

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL(StrR) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr

簡(jiǎn)要說(shuō)明：

EPI400菌株來(lái)源于 EC100菌株，將 EC100 核基因中控制質(zhì)?？截悢?shù)的 pcnB基因刪除后引入一個(gè)誘導(dǎo)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的 pcnB基因，即是EPI400 菌株。 EPI400 菌株可以降低質(zhì)粒的拷貝數(shù)，特別適合于各種不穩(wěn)定DNA 或毒性基因的克隆，在加入誘導(dǎo)劑Copy Cutter InductionSolution后又可以提高質(zhì)粒產(chǎn)量到正常狀態(tài)。 [mcrA, Δ(mrrhsdRMS-mcrBC)]基因型使 EPI400 菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA。 recA1 和endA1 的突變有利于插入DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA 的提取。lacZΔM15 標(biāo)記的存在使EPI400可用于藍(lán)白斑篩選，tonA 賦予其抗噬菌體T1和 T5的能力，rpsL賦予其LIAN霉素抗性。EPI400感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>108 cfu/μg DNA。

操作說(shuō)明：

1. EPI400感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中），加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。 

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌2YT或LB培養(yǎng)基，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。 

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。 

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。 

2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。 

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。