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ArcticExpress(DE3) 感受態(tài)細胞

簡要描述:ArcticExpress(DE3) 感受態(tài)細胞 保存條件:-80℃ 基因型E.coli B F– ompT hsdS(rB–mB–) dcm+
TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR]

  • 產(chǎn)品型號:ABG225-50
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時間:2024-03-27
  • 訪  問  量:255

詳細介紹

品牌Abnbio貨號ABG225-50
規(guī)格50X100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途感受態(tài)細胞應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,食品,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥

基因型

E.coli B F– ompT hsdS(rB–mB–) dcm+TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR]


簡要說明

ArcticExpress (DE3)來源于E. coli B,為Lon和OmpT蛋白酶缺陷型菌株,可促進表達蛋白的穩(wěn)定。ArcticExpress(DE3)菌株染色體DNA中整合了λ噬菌體DE3區(qū),使得ArcticExpress(DE3)菌株可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,廣泛用于pET系列,pGEX,pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達。ArcticExpress(DE3)菌株具有四環(huán)素,qing大霉素抗性,endA1突變有利于質(zhì)粒DNA的穩(wěn)定。[cpn10cpn60 GentR]的存在使ArcticExpress(DE3)可以表達適應(yīng)低溫的伴侶蛋白Cpn10和Cpn60(來自嗜冷菌—Oleispira antarctica)。Cpn10和Cpn60伴侶蛋白在4-12℃表現(xiàn)出較高活性,在ArcticExpress (DE3)細胞中表達時,可降低重組蛋白包涵體的形成,增加可溶重組蛋白的表達量及生物活性,比傳統(tǒng)的原核表達伴侶蛋白GroEL、GroES等具有更加優(yōu)異的促融性能。ArcticExpress (DE3)感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達108cfu/μg DNA。


操作說明

1、ArcticExpress (DE3) 感受態(tài)細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,待菌塊融化,加入目的質(zhì)粒,并用手撥EP管底混勻,冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率

3. 向離心管中加入700 µl不含抗生素的無菌LB培養(yǎng)基,混勻后37℃,200rpm復(fù)蘇60分鐘。

 4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 µl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上(平板中務(wù)必同時含有34µg/ml的lu霉素,40µg/ml的qing大霉素和轉(zhuǎn)化質(zhì)粒本身的篩選抗生素;若質(zhì)粒濃度較高,也可稀釋后涂板,務(wù)必保證能在平板上挑到單克隆菌落)。 

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。


注意事項

1、感受態(tài)細胞最好在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。除復(fù)蘇培養(yǎng)基為無抗生素外,其余所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)液均應(yīng)含有40ug/ml的、qing大霉素,以防質(zhì)粒丟失。

3. 為獲得需要量的蛋白,最佳誘導(dǎo)時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。

4. ArcticExpress (DE3)感受態(tài)細胞具有四環(huán)素、qing大霉素抗性,不可用于具有四環(huán)素、qing大霉素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。













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