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Tuner(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞

簡要描述:Tuner(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 保存條件:-80℃ 基因型F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm lacY1 (DE3)

  • 產(chǎn)品型號:ABG220-50
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時間:2024-03-27
  • 訪  問  量:239

詳細(xì)介紹

品牌Abnbio貨號ABG220-50
規(guī)格50X100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,食品,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥

基因型

F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm lacY1 (DE3)


簡要說明

Tuner(DE3)菌株是BL21菌株的lacZY基因(半乳糖苷透性酶基因)突變株,此突變導(dǎo)致IPTG以均一速度進(jìn)入體系中大腸桿菌的每個細(xì)胞,產(chǎn)生更加嚴(yán)格、均一的濃度依賴。此菌株用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達(dá)載體(如pET系列)的基因。λ噬菌體DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶,該區(qū)整合于Tuner的染色體上,所以稱為Tuner(DE3),可同時表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。Tuner(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作,經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達(dá)107cfu/μg。


操作說明

1、取100μl冰上融化的Tuner(DE3)感受態(tài)細(xì)胞,加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養(yǎng)基,混勻后37℃,200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。


注意事項

1、感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。

2.混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。

4.誘導(dǎo)時,IPTG濃度可選(0.1-40mM均可)。

5.為獲得需要量的蛋白,最佳誘導(dǎo)時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。












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