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OrigamiB(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞

簡要描述:OrigamiB(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞 保存條件:-80℃ 基因型F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC(DE3)gor522::Tn10 trxB (KanR,TetR) pLysS CamR

  • 產(chǎn)品型號:ABG216-50
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時間:2024-03-27
  • 訪  問  量:265

詳細(xì)介紹

品牌Abnbio貨號ABG216-50
規(guī)格50X100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,食品,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥

基因型

F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC(DE3)gor522::Tn10 trxB (KanR,TetR) pLysS CamR


簡要說明

Origami B (DE3) pLysS菌株攜帶pLysS質(zhì)粒,具有l(wèi)u霉素抗性。pLysS可表達(dá)T7yu菌酶(T7 yu菌酶可以作用于大腸桿菌細(xì)胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌,還可與T7RNA聚合酶結(jié)合抑制其轉(zhuǎn)錄活性,進(jìn)而降低目的基因的背景表達(dá)水平,但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá)),適合表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白。Origami B (DE3) pLysS菌株表達(dá)突變的硫氧還蛋白還原酶 (thioredoxin reductase) (trxB)和gu胱甘肽還原酶(glutathione reductase) (gor),這兩個酶是還原途徑的關(guān)鍵酶,突變后有利于形成正確折疊的含有二硫鍵的蛋白,增強蛋白的可溶性。此外,該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)(DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶),可同時表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá),具有l(wèi)u霉素、ka那霉素和四環(huán)素抗性,不能用于具有l(wèi)u霉素,ka那霉素抗性質(zhì)粒的表達(dá)。Origami B (DE3) pLysS感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達(dá)108 cfu/μg DNA。


操作說明

1、取100μl冰上融化的Origami B (DE3) pLysS感受態(tài)細(xì)胞,加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

 3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養(yǎng)基,混勻后37℃,200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。


注意事項

1、取100μl冰上融化的Origami B (DE3) pLysS感受態(tài)細(xì)胞,加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養(yǎng)基,混勻后37℃,200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。










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