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Origami2(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞

簡要描述:Origami2(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 保存條件:-80℃ 基因型Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoRaraD139ahpCgalE galK rpsL F′[lac+ lacIq pro] (DE3)gor522::Tn10trxB (StrR, TetR)

  • 產(chǎn)品型號(hào):ABG214-50
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時(shí)間:2024-03-27
  • 訪  問  量:234

詳細(xì)介紹

品牌Abnbio貨號(hào)ABG214-50
規(guī)格50X100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,食品,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥

基因型

Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoRaraD139ahpCgalE galK rpsL F′[lac+ lacIq pro] (DE3)gor522::Tn10trxB (StrR, TetR)


簡要說明

Origami 2系列菌株是K-12菌株衍生而來,在thioredoxinreductase (trxB)和glutathione reductase(gor)基因上同時(shí)含有突變,這使得該菌株能夠更加高效的在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)生成二硫鍵,有助于含二硫鍵蛋白的活性蛋白形成。與Origami系列菌株相比,Origami 2系列菌株是卡那敏感的,這使得該菌株能夠適用于大多數(shù)的蛋白表達(dá)質(zhì)粒。Gor基因突變使得該菌株和原來的Origami(DE3)菌株一樣具有四環(huán)素抗性。DE3是溶源性的λDE3,所以在lacUV5啟動(dòng)子下攜帶有T7 RNA聚合酶的染色體拷貝。該菌株適用于pET系列載體,及其他T7啟動(dòng)子系列載體。Origami2 (DE3)同時(shí)還是liang氨酸生長缺陷型宿主菌,可用于相關(guān)的克隆以及蛋白表達(dá),在IPTG的誘導(dǎo)下可進(jìn)行蛋白表達(dá)。Origami2 (DE3) 感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作,經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達(dá)108cfu/μg。


操作說明

1、取100μl冰上融化的Origami2(DE3)感受態(tài)細(xì)胞,加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養(yǎng)基,混勻后37℃,200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。


注意事項(xiàng)

1、感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。

2.混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。

4.誘導(dǎo)時(shí),IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。

5.為獲得需要量的蛋白,最佳誘導(dǎo)時(shí)間,溫度,IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。









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