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Rosetta-gami(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞

簡(jiǎn)要描述:Rosetta-gami(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞 保存條件:-80℃ 基因型Δ(araleu)7697ΔlacX74phoAPvuIIphoRaraD139ahpCgalEgalKrpsL(DE3)F[lac+lacIqpro]gor522::Tn10 trxB pLysSRARE2(CamR,StrR , TetR )

  • 產(chǎn)品型號(hào):ABG213-50
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時(shí)間:2024-03-27
  • 訪  問(wèn)  量:259

詳細(xì)介紹

品牌Abnbio貨號(hào)ABG213-50
規(guī)格50X100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,食品,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥

基因型

Δ(araleu)7697ΔlacX74phoAPvuIIphoRaraD139ahpCgalEgalKrpsL(DE3)F[lac+lacIqpro]gor522::Tn10 trxB pLysSRARE2(CamR,StrR , TetR )


簡(jiǎn)要說(shuō)明

Rosetta-gami(DE3)pLysS 菌株聚合了不同原核表達(dá)菌株的優(yōu)勢(shì):Rosetta-gami賦予其Rosetta和Origami的優(yōu)點(diǎn)——補(bǔ)充大腸桿菌缺乏的6 種稀有密碼子(AUA,AGG,AGA,CUA,CCC, GGA) 對(duì)應(yīng)的tRNA,提高外源基因的表達(dá)水平,并且包含突變的硫氧還蛋白還原酶(thioredoxin reductase)(trxB)和gu胱甘肽還原酶(glutathione reductase)(gor)基因,表達(dá)主要還原途徑的兩個(gè)關(guān)鍵酶。有利于形成正確折疊的含有二硫鍵的蛋白,增強(qiáng)蛋白的可溶性。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)(DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶),適合T7啟動(dòng)子誘導(dǎo)的蛋白表達(dá)。該菌株攜帶的pLysS質(zhì)粒含有表達(dá)T7 yu菌酶的基因,能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平,但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá),適合表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白。Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株具有ka那霉素,lu霉素,lian霉素,四環(huán)素抗性,經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率高達(dá)107cfu/μg。


操作說(shuō)明

1、取100μl冰上融化的 Rosetta-gami(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞,加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。

2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌2YT或LB培養(yǎng)基,混勻后37℃,200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含34 µg/ml lu霉素及所選質(zhì)粒篩選抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。


注意事項(xiàng)

1、感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。

2.混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。

4.誘導(dǎo)時(shí),IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。

5.為獲得需要量的蛋白,最佳誘導(dǎo)時(shí)間,溫度,IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。 

6.菌株攜帶 pLysS質(zhì)粒,除復(fù)蘇培養(yǎng)基為無(wú)抗生素外,其余所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)液均應(yīng)含有34 µg/ml lu霉素,以防質(zhì)粒丟失。

7.具有ka那霉素抗性,不能用于具有ka那霉素抗性質(zhì)粒的表達(dá)。








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