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Rosetta 2(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞

簡要描述:Rosetta 2(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 保存條件:-80℃ 基因型F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3) pRARE(argU,argW,ileX,glyT,leuW,proL)(CamR)

  • 產(chǎn)品型號(hào):ABG210-50
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時(shí)間:2024-03-25
  • 訪  問  量:256

詳細(xì)介紹

品牌Abnbio貨號(hào)ABG210-50
規(guī)格50X100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,食品,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥

基因型

F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3) pRARE(argU,argW,ileX,glyT,leuW,proL)(CamR)


簡要說明

Rosetta(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞具有l(wèi)u霉素抗性,補(bǔ)充大腸桿菌缺乏的6 種稀有密碼子(AUA,AGG, AGA, CUA,CCC,GGA) 對(duì)應(yīng)的tRNA,提高外源基因,尤其是真核基因在原核系統(tǒng)中的表達(dá)水平,該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)(DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶),同時(shí)表達(dá)T7RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。Rosetta(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作,經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率高達(dá)108cfu/μg。


操作說明

1、Rosetta 2(DE3)感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的質(zhì)粒并用手撥EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。 

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的LB無菌培養(yǎng)液,37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

 4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取50 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。



注意事項(xiàng)

1、感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過長,長時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。

3. 誘導(dǎo)時(shí),IPTG濃度可選(0.1-10 mM均可)。

4. 為獲得需要量的蛋白,最佳誘導(dǎo)時(shí)間,溫度,IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。

 5. Rosetta 2(DE3) 菌株攜帶pRARE2質(zhì)粒,除復(fù)蘇培養(yǎng)基為無抗生素外,其余所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)液均應(yīng)含有34µg/mllu霉素,以防質(zhì)粒丟失。








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