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Chemically發(fā)根(熱激)感受態(tài)

簡要描述:Ar Qual Chemically Competent Cell/Chemically發(fā)根(熱激)感受態(tài)
保存條件:-80℃

  • 產(chǎn)品型號:Ar Qual
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時間:2024-03-25
  • 訪  問  量:304

詳細介紹

品牌Abnbio貨號ABN401-100
規(guī)格100支100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途細胞培養(yǎng)應用領域化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥

Ar Qual Chemically Competent Cell  發(fā)根(熱激)感受態(tài)細胞

基因型:

Agrobacterium rhizogenes (strR,CamR ) Ar Qual Ri(agropine type)

簡要說明:

發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌,它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個別裸子植物。Ar.Qual發(fā)根農(nóng)桿菌菌株含有農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒,具有廣泛的宿主范圍(玉米,煙草,番茄,柑橘等),同時具有l(wèi)ian霉素,lu霉素抗性。Ar.Qual化學轉化感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作,pCAMBIA2301質(zhì)粒(ka那霉素抗性)檢測,轉化效>104 cfu/μgDNA。

操作說明:

一:取-80℃保存的Ar A4發(fā)根農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化,處于冰水混合狀態(tài)時插入冰中。

二:每100μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA(轉化效率較高,第一次使用前最好做預實驗確定所加質(zhì)粒的量),用手快速、劇烈bo打管底混勻或用槍吹吸混勻,依         次放于冰中靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。

三:冰浴中拿出放室溫,加入700μl 無抗生素的TY 液體培養(yǎng)基,于 28℃振蕩培養(yǎng) 2小時。

四:6000 rpm 離心一分鐘收菌,留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的 TY平板上,倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2-3 天

注意事項:

一:加入質(zhì)粒時體積不應大于感受態(tài)體積的1/10;質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機物污染,轉化效率急劇下降;質(zhì)粒增大一倍,轉化效率下降一個數(shù)量級。

二:混勻質(zhì)粒時應用手指快速bo打管底或用槍吹吸混勻,務必使質(zhì)??焖?、均勻分散開,與感受態(tài)細胞充分接觸。轉化高濃度的質(zhì)??上鄳獪p少最終用于涂板的菌             量。

三:平板上陽性克隆密度過大時,由于營養(yǎng)不足,陽性克隆生長變慢,菌落變小,為了獲得大的菌落,應減少質(zhì)粒用量或降低涂板的菌量。

四:Ar.Qual具有l(wèi)ian霉素、lu霉素抗性,不可用于具有l(wèi)ian霉素抗性或lu霉素抗性質(zhì)粒的轉化。


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