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Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細(xì)胞

簡要描述:Stbl2 Chemically Competent Cell Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細(xì)胞
保存條件:-80℃

  • 產(chǎn)品型號:Stbl2
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時間:2024-03-20
  • 訪  問  量:315

詳細(xì)介紹

品牌Abnbio貨號ABG013-50
規(guī)格50支100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥

Stbl2 Chemically Competent Cell

基因型:

F- mcrAΔ(mcrBC-hsdRMS-mrr) recA1 endA1 lon gyrA96 thisupE44 relA1 λ-Δ(lac-proAB)

簡要說明:

Stbl2菌株來源于JM109 E.coli strain,適合克隆不穩(wěn)定插入片段(正向重復(fù)序列,逆轉(zhuǎn)錄病毒序列等);mcrA突變和mcrBC-hsdRMS-mrr deletion使該菌株更適于克隆甲基化的基因組序列;同時Stbl2也可用于慢病毒載體的構(gòu)建。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。不存在lacIqZΔM15,不可用于藍(lán)、白斑篩選。High5TM系列Stbl2感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,經(jīng)pUC19檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá)109cfu/μg DNA。

操作說明:

1.Stbl2感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化(或放手心或室溫片刻,待菌體處于冰水混合狀態(tài)時迅速插入冰中),加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物)并用手打EP管底輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。 

2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。 

3.向離心管中加入0.9 mL 室溫 S.O.C. 培養(yǎng)基或LB培養(yǎng)基(推薦使用S.O.C培養(yǎng)基,提高轉(zhuǎn)化效率)。

4.30℃,225 rpm復(fù)蘇90分鐘。(當(dāng)質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時,30℃培養(yǎng)可降低錯誤重組的概率,若轉(zhuǎn)化control PUC19計算轉(zhuǎn)化效率,則需37℃,225 rpm復(fù)蘇60分鐘。) 

5. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的S.O.C.或LB培養(yǎng)基上。 

6.將平板倒置放于30℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。(若轉(zhuǎn)化controlPUC19 計算轉(zhuǎn)化效率,則需37℃培養(yǎng)過夜)。

注意事項:

1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。

2.混入質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作。 

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?;蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。

 4.S.O.C.或LB培養(yǎng)基均可使用,S.O.C.可提高轉(zhuǎn)化效率20%;實驗人員可選擇在37℃或30℃培養(yǎng)細(xì)胞,37℃條件下,菌生長速度加快,有利于提高質(zhì)粒產(chǎn)量,30℃培養(yǎng)可降低錯誤重組概率。

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