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Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細(xì)胞

簡(jiǎn)要描述:Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細(xì)胞 Mach1-T1 Chemically Competent Cell 保存條件:-80℃
Mach1-T1 菌株由野生型 non-K-12 E. Coli W 菌株改造而來(lái),是目前生長(zhǎng)速度較快的感受態(tài)細(xì)胞之一,在平板上9 h 可見(jiàn)克隆,缺失核酸內(nèi)切酶 (endA),提高了質(zhì)粒 DNA 的產(chǎn)量和質(zhì)量。

  • 產(chǎn)品型號(hào):Mach1-T1 或 T1
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時(shí)間:2024-03-19
  • 訪(fǎng)  問(wèn)  量:314

詳細(xì)介紹

品牌Abnbio貨號(hào)ABG005-100
規(guī)格100支100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥

Chemically Competent Cell克隆感受態(tài)細(xì)胞     Mach1-T1 Chemically Competent Cell 

基因型:

F- φ80(lacZ)ΔM15 ΔlacX74 hsdR(rK- mK+) ΔrecA1398endA1 tonA

簡(jiǎn)要說(shuō)明:

Mach1-T1 菌株由野生型 non-K-12 E. Coli W 菌株改造而來(lái),是目前生長(zhǎng)速度較快的感受態(tài)細(xì)胞之一,在平板上 9 h 可見(jiàn)克隆,缺失核酸內(nèi)切酶 (endA),提高了質(zhì)粒 DNA 的產(chǎn)量和質(zhì)量;重組酶缺陷型 (recA1398)減少插入片段的同源重組概率,保證了插入 DNA 的穩(wěn)定性;lacZ M15 的存在使 Mach1-T1 可用于藍(lán)、白斑篩選;tonA 突變賦予 Mach1-T1 菌株對(duì)噬菌體T1 和 T5 的抗性。Mach1-T1 感受態(tài)細(xì)胞 經(jīng)特殊工藝制作,pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>5x108 cfu/μg DNA

操作說(shuō)明:

1.Mach1-T1 感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,待菌塊融化,加入目的 DNA(質(zhì)?;蜻B接 產(chǎn)物)并用手打 EP 管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置 25 分鐘。

2.42℃水浴熱激 45 秒,迅速放回冰上并靜置 2 分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3.向離心管中加入 700 μl 不含抗生素的無(wú)菌2YT 或 LB培養(yǎng)基,混勻后 37℃,200 rpm 復(fù)蘇 60 分鐘。

4.5000 rpm 離心一分鐘收菌,留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的 2YT 或 LB 培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,將平板放 37℃培養(yǎng)至少 13 h。

注意事項(xiàng)

1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中 8 分鐘內(nèi)加入目標(biāo) DNA,不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),長(zhǎng)時(shí)間 存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2.混入目的 DNA 時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?;蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。


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